Un ejemplo de Técnica de Edición de Acidos Nucléicos en la fibrosis quistica: Reparación específica de alelos de mutaciones de empalme en fibrosis quística a través de la edición del genoma asCas12a

 Reparación específica de alelos de mutaciones de empalme en fibrosis quística a través de la edición del genoma asCas12a

Tipo de Edición: Ex vivo (somático) 

Dirigido hacia: ARN

Dirigido por:

• CRISPR SpCas9 y AsCas12a
• ARN de guía única (sgRNA)
• Transempalme de ARN mediadas por espliceosomas (SMaRT)
• Plásmido pMG3272-26WT y pMG3849+10kbWT
• Plásmido vector de transferencia (pY108 lentiAsCas12a o lentiCRISPR v1)

Órgano a tratar: Organoides intestinales y células epiteliales de las vías respiratorias derivadas de pacientes con FQ (somático)

Vía de administración: lentiviral y adenoviral (cultivos)

Resultados a corto plazo: la adición del gen CFTR cDNA a través de vectores virales o no virales en animales de "experimentación" ha tenido resultados positivos, sin embargo, hay bajos niveles de expresión del CFTR administrado.

Resultados a largo plazo: La recuperación funcional del CFTR mediante la estrategia de ARNcr único AsCas12a en organoides intestinales derivados de pacientes con FQ portadores, teóricamente podría ser una solución permanente.

Bibliografia

1.	Maule G, Casini A, Montagna C, Ramalho AS, De Boeck K, Debyser Z, et al. Allele specific repair of splicing mutations in cystic fibrosis through AsCas12a genome editing. Nat Commun [Internet]. 2019;10(1):3556. Disponible en: http://www.nature.com/articles/s41467-019-11454-9

Un ejemplo de Terapia con Stem Cells: Células madre pluripotentes inducidas para el tratamiento de la fibrosis quística: estado de la ciencia

 

Células madre pluripotentes inducidas para el tratamiento de la fibrosis quística: estado de la ciencia

Tipo de Stem Cell: células madre pluripotentes inducidas (iPSC)

Método de obtención:  

1. Obtener fibroblastos de un paciente con FQ (cultivo)
2.  Inducir iPSCs a partir de los fibroblastos (desdiferenciación)
3. Corregir la mutación CFTR,  (CRISPR/Cas9 o nucleasas de dedos de zinc (ZFN))
4. Aumentar un número ilimitado de iPSC corregidas (edición de genes)
5. Inducir a las iPSC a diferenciarse (coctel de genes)

Vía de administración: Vía intravenosa
Resultados a corto, mediano y largo plazo: "Teóricamente" el tratamiento con células madre inducidas es una de las técnicas mas comprometedoras contra la fibrosis quística citando la opinión de Shinya Yamanaka, Premio Nobel 2012 por el desarrollo de la tecnología iPSC, quien concluyó que "el potencial es enorme, pero quedan muchos obstáculos antes de que esta tecnología pueda convertirse en terapia".

Bibliografia

1.	Pollard BS, Pollard HB. Induced pluripotent stem cells for treating cystic fibrosis: State of the science. Pediatr Pulmonol [Internet]. 2018;53(S3):S12–29. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1002/ppul.24118